CD4 and CD8 T cell response to the rHSP60 from Klebsiella pneumoniae in peripheral blood mononuclear cells from patients with ankylosing spondylitis / Respuesta de linfocitos T CD4 y CD8 contra la rHSP60 de Klebsiella pneumoniae en células mononucleares de sangre periférica de pacientes con espondilitis anquilosa

Objective. To determine the processing pathways used by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and present the rHSP60Kp, and the T cell subpopulations involved in the response, in patients with ankylosing spondylitis (AS) Methods. The lymphoproliferative response to the rHSP60Kp in PBMC from 14 HLA-B27 + AS patients and 15 B27 healthy controls was assessed by ³H-TdR incorporation. The processing pathways for the rHSP60Kp were analyzed by ³H-TdR incorporation in fresh PBMC from patients using homologous PBMC preincubated with the antigen and specific inhibitors: chloroquine, N-acetyl-L-leucil-L-leucil-L-nor-leucinal (LLnL) or brefeldin A (BFA), fixed with p-formaldehyde (fixed APC). The CD4+/CD8+ T cell subpopulation activated with the antigen was determined by three colours flow cytometry in PBMC from patients. Results. Eight out of fourteen patients showed positive lymphoproliferative responses to the rHSP60Kp while none of the healthy controls responded (p < 0.012). In five patients S.I. was above 4.0. In these patients lymphoproliferation was lower when chloroquine and LLnL was used and it became negative with BFA, indicating that both pathways are used. CD4+ and CD8+ T cells populations expressed CD69 when activated by the rHSP60Kp. Conclusions. Our results suggest that CD4 and CD8 T cells participate in the response to the rHSP60Kp in B27+ AS patients.

Objetivo.Determinar las vías utilizadas por las células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de pacientes con espondilitis anquilosante para procesar a la rHSPGO de Klebsiella pneumoniae (rHSPGOKp) y las subpoblaciones de linfocitos T involucrados en la activación. Métodos. Se determinó la respuesta linfoproliferativa, por incorporación de ³H-TdR en CMSP, en presencia de la rHSPGOKp, en 14 pacientes con EA HLA-B27+y en 15 sujetos sanos HLA-B27-. La ruta de procesamiento y presentación de la rHSPGOKp se determinó por incorporación de ³H-TdR en las CMSP de los pacientes utilizando como células presentadoras a las CMSP homologas, preíncubadas con el antígeno y los inhibidores específicos: cloroquína, brefeldína A y N-acetil-L-leucil-L-leucil-L-nor-leucinal (LLnL), y fijadas con p-formaldehído. Se evaluaron las subpoblaciones de linfocitos T CD4+ y CD8+ que expresaron CD69, frente al antígeno, por citometría de flujo. Resultados. Ocho de los 14 pacientes y ninguno de los sujetos sanos, tuvo respuesta linfoproliferativa positiva (IE > 3.0) contra la rHSPGOKp (p < 0.012). En cinco de los pacientes el I.E. fue superior a 4.0. En estos pacientes la linfoproliferación disminuyó cuando se utilizó cloroquína y LLnL, y se hizo negativa cuando se utilizó BFA, lo que indica que ambas vías son empleadas. Las subpoblaciones de linfocitos T (CD4+ y CD8+) expresaron CD69 frente al antigeno. Conclusiones. Nuestros resultados sugieren que ambas poblaciones de linfocitos T: CD4+ y CD8+ participan en la respuesta a la rHSPGOKp.

Recognition of Streptococcus pyogenes and skin autoantigens in Guttate psoriasis

Background. Guttate psoriasis is associated with infections by Streptococcus pyogenes and cross-reaction between skin and streptococcal antigens have been reported, suggesting an autoimmune component in the disease. Methods. In this work, the authors looked for antibodies against S. pyogenes M-5 antigens by immunoblot in 52 sera of psoriasis patients and in 52 sera of normal individuals. Histological and immunohistochemical analysis in skin biopsies from lesions of another group of 16 clinically diagnosed guttate psoriasis patients and four healthy controls were also carried out. Results. All guttate psoariasis patients studied (11) had IgG antibodies that intensively recognized three different proteins of 70,60 and 14 kDa, as compared to sera from patients with other forms of psoriasis or from healthy controls. The diagnosis of psoariasis was confirmed in 14 of the patients by hematoxylin-eosin staining. Of the other two patients, one was diagnosed as parapsoriasis and the other as liquen. By indirect immunofluorescence (IFI), all 14 psoriatic patients had autoantibodies against their own lesional skin that did not recognized normal skin from control subjects or from the two non-psoriatic patients. The parapsoriatic and the liquen patients did not have autoantibodies. A rabbit immune serum against S. pyogenes antigens reacted with lesional skin from the 14 guttate psoriatic patients, but not with normal skin from controls or with lesional skin from the 2 non-psoriatic patients. Conclusions. The recognition by immunoblot of streptococcal antigens by serum of guttate psoriasis patients, the presence of autoantibodies against their own skin, and recognition of the same skin antigens by anti-streptococcal rabbit antibodies confirm the participation of the immune system and of streptococcal infection in guttate psoriasis

Antibody response to nitrogenase-positive and-negative Klebsiella pneumoniae strains in juvenile-onset ankylosing spondylitis patients and their first degree relatives: lack of differential recognition of the bacterial nitrogenase

En la búsqueda de las consecuencias patogénicas del mimetismo molecular entre la nitrigenasa de Klebsiella pneumoniae y el antígeno HLA-B27, se determinó la presencia de anticuerpos contra extractos completos de cepas de K. pneumoniae nitrogenasa positiva y negativa en el suero de individuos pertenecientes a 16 familias con casos de espondilitis anquilosante juvenil. Se hizo una selección inicial de cepas de K. pneumoniae productoras e nitrogenasa a partir de 31 aislamientos clínicos. Se buscó la mejor cepa productora de nitrogenasa así como una no productora y mediante inmunoelectrotransferencia se hizo un análisis del suero de 82 sujetos, de los cuales 55 fueron HLA-B27 positivos y de éstos, 26 mostraron alguna manifestación clínica. Aunque los patrones electroforéticos fueron diferentes con ambas cepas, no hubo reconocimiento distintivo o diferencial de las proteínas de 30 a 40 kDa donde se ubica el sub-componente de la nitrogenasa que tiene la secuencia QTDRED que se comparte con la molécula HLA-B27. Por otra parte, se encontró un fuerte reconocimiento de una proteína de 60 kDa (p60Kp) en el 75 por ciento de los sujetos HLA.B27 positivos, independientemente de su estado clínico. Actualmente se están realizando estudios para determinar la naturaleza de dicha molécula y su papel en la patogenia de la espondilitis anquilosante

Utilidad de la técnica de inmunoensayo enzimático ELISA en el diagnóstico de la tuberculosis pulmonar en el niño / Usefulness of ELISA enzymatic immunoessay technique in the diagnosis of pulmonary tuberculosis in children

Los métodos inmunológicos para diagnóstico de la tuberculosis pulmonar, cuya utilidad ha sido probada en el adulto, no ha sido suficientemente estudiados en el niño. En este trabajo se evalúa en pacientes pediátricos la respuesta inmune-celular a través de la intradermorreacción con PPD y la respuesta humoral a antígenos de Mycobacterium tuberculosis, por ensayo inmunoenzimático (ELISA) y contrainmunoelectroforesis (CIE). La intradermorreacción se practicó con dos UI de PPD. La técnica de ELISA indirecto se practicó de acuerdo al método de Voller y Bidwell y la CIE se llevó a cabo en agarosa al 0.7 por ciento en regulador de barbituratos 0.625 M, pH 8.6. Se estudiaron 18 niños con tuberculosis pulmonar comprobada, 20 niños con tuberculosis pulmonar no comprobada y 52 niños neumópatas crónicos en los cuales se descartó tuberculosis pulmonar y extrapulmonar. La serie se dividió en pacientes no vacunados y en vacunados con BCG. La intradermorreacción al PPD mostró baja positividad en niños con tuberculosis pulmonar comprobada y en no tuberculosos pero vacunados con BCG, lo cual se explica en función de la poca capacidad de respuesta inmune del niño, o bien por defectos en la aplicación del biológico. La CIE fue positiva en el 50 por ciento de los niños con tuberculosis pulmonar comprobada. Se encontró además una reacción cruzada con BCG en los niños vacunados. Estos resultados difieren de lo informado en el adulto. Los resultados de ELISA indican que esta prueba es muy específica porque detectó a todos los pacientes con tuberculosis pulmonar comprobada o no comprobada en un humbral de 0.8 de D.O. y porque en niños no tuberculosos y no vacunados los valores de ELISA se encontraron por abajo del humbral de corte. En el grupo de niños no tuberculosos pero vacunados con BCG se observó una reacción cruzada, lo cual plantea la necesidad de investigar un antígeno específico para M. tuberculosis